文章信息
- 韦焘, 杨朝军, 陈敏, 贾曼红, 马艳玲, 罗红兵, 陆林.
- Wei Tao, Yang Chaojun, Chen Min, Jia Manhong, Ma Yanling, Luo Hongbing, Lu Lin.
- 云南省2个边境地区新报告艾滋病病毒感染者HIV-1基因亚型分析
- HIV-1 gene subtypes among newly reported HIV/AIDS cases in two border areas of Yunnan province
- 中华流行病学杂志, 2018, 39(12): 1617-1620
- Chinese Journal of Epidemiology, 2018, 39(12): 1617-1620
- http://dx.doi.org/10.3760/cma.j.issn.0254-6450.2018.12.015
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文章历史
收稿日期: 2018-07-08
2. 650022 昆明, 云南省疾病预防控制中心;
3. 650200 昆明, 云南省卫生和计划生育委员会
2. Yunnan Provincial Center for Disease Control and Prevention, Kunming 650022, China;
3. Health and Family Planning Commission of Yunnan Province, Kunming 650200, China
云南省边境地区的艾滋病疫情较重且艾滋病流行时间长,近年来边境地区的大量外籍务工人员跨境往来频繁,给艾滋病防控工作带来挑战。云南省每年报告外籍HIV感染者近1 000例[1],德宏傣族景颇族自治州(德宏州)与缅甸接壤,红河哈尼族彝族自治州(红河州)与越南接壤,2个州累计报告外籍HIV感染者例数在云南省占比>80.0%。本研究分析了云南省德宏州和红河州边境地区新报告HIV感染者HIV-1基因亚型分布特征,为加强云南省边境地区艾滋病防控工作提供参考依据。
对象与方法1.研究对象:以云南省德宏州(芒市、瑞丽市和盈江县)和红河州(河口县)为研究现场,研究对象纳入标准为2015年11月1日至2016年10月31日年龄≥18岁的新报告HIV感染者,连续纳入233例。排除标准为不愿意参加本研究,或者未获得目的基因片段。研究对象经过知情同意后,由统一培训的当地CDC专业人员采集其血液标本,并接受面对面问卷调查,调查内容包括国籍、性别等人口学信息、感染途径等HIV感染相关信息。
2.基因分型检测:
(1)HIV-1 RNA提取:使用Qiagen公司QIAamp Viral RNA试剂盒,根据标准操作程序从140 μl中提取HIV-1 RNA。
(2)巢式PCR扩增pol和env基因区:使用TaKaRa公司One Step RNA PCR Kit(AMV)试剂盒,进行反转录及第1轮PCR扩增,反应体系25 μl。使用天根生化科技(北京)有限公司2×Taq PCR MasterMix试剂盒,进行第2轮PCR扩增反应,反应体系50 μl。引物序列和反应条件见参考文献[2]。
(3)PCR扩增产物电泳鉴定和测序:使用1%琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物条带,阳性标本送北京诺赛基因组研究中心有限公司纯化和测序。
3.序列分析:使用Gene Codes公司Sequencher 5.0软件进行序列拼接,Bioedit 7.0软件进行多序列比对和序列整理。用Mega 5.1软件构建Neighbor-joining(NJ)系统进化树,Bootstrap=1 000。利用HIV database的RIP 3.0分析工具进行重组分析(http://www.hiv.lanl.gov)。
4.统计学分析:应用SPSS 19.0软件进行统计学分析,率的比较采用χ2检验或Fisher精确概率法,检验水准α=0.05,双侧检验。
结果1.人口学特征:233份标本进行检测后,获得pol区片段128条,env区片段160条,结合2个基因区的进化分析,146份标本获得基因亚型。146例研究对象中男性(67.1%,98/146)、年龄≤30岁(48.6%,71/146)、已婚(48.0%,70/146)、异性性接触感染(67.8%,99/146)比例较大,2个地区HIV感染者在国籍、性别、年龄、婚姻、感染途径等人口学特征的差异无统计学意义(P>0.05)。
2. HIV-1基因分布特征:德宏州和红河州HIV-1基因亚型总体分布的差异有统计学意义(χ2=61.072,P<0.001)。
(1)德宏州:HIV-1基因型种类复杂,有8种HIV-1基因亚型,以独特重组型(unique recombinant forms,URFs)为主(52.8%,57/108),是中国籍和缅甸籍的主要基因型,其中,中国籍的URFs占56.8%(21/37),缅甸籍的URFs占50.7%(36/71),详见表 1。中国籍有8种基因亚型,缅甸籍只有4种基因亚型。德宏州HIV- 1基因型在国籍(χ2=18.498,P=0.002)、性别(χ2=14.532,P=0.015)和感染途径(χ2=17.034,P=0.003)的差异有统计学意义。男性HIV感染者的基因亚型种类多于女性,且男性URFs比例高于女性。在HIV感染途径方面,同性性接触的感染例数少,仅比较了异性性接触和静脉注射吸毒的差异,异性性接触的基因型复杂,静脉注射吸毒的基因亚型只有URFs、C亚型和CRF01_AE。见表 1。
(2)红河州:有4种HIV-1基因亚型,以CRF01_AE为主(71.1%,27/38),其中越南籍的占81.0%(17/21),中国籍的占58.8%(10/17)。在感染途径上的差异无统计学意义(χ2=4.747,P=0.174),国籍上的差异有统计学意义(χ2=12.246,P=0.002)。越南籍的基因亚型以CRF01_AE为主(81.0%,17/21),中国籍的基因亚型以CRF01_AE(58.8%,10/17)和CRF08_BC(41.2%,7/17)为主,见表 1。
讨论本研究发现,德宏州和红河州HIV感染者HIV-1基因型分布差异较大,德宏州以URFs为主(52.8%,57/108),有8种基因亚型,在国籍、性别和感染途径上的分布有差异;红河州以CRF01_AE为主(71.1%,27/38),有4种HIV-1基因亚型,种类相对较少,在国籍上的分布有差异,感染途径的分布差异无统计学意义。
1980年代末到1990年代初,德宏州注射吸毒人群主要流行的HIV-1亚型是泰国B亚型和印度C亚型[3-5]。B亚型和C亚型的共同存在,产生了重组亚型,回顾性进化分析提示一些流行重组株(circulating recombinant forms,CRFs)就起源于这个时期[6],此外还产生大量的URFs[7],因此,中缅边境地区被认为是HIV-1基因重组的热点地区[8-9]。本研究中,德宏州的URFs仍具有较高的比例(52.8%),中国籍URFs包括B/C 16例、CRF01_AE/B 2例、CRF01_AE/B/C 2例和CRF01_AE/C 1例,缅甸籍的URFs包括B/C 17例、CRF01_AE/B 3例、CRF01_AE/B/C 8例和CRF01_AE/C 8例。这与德宏州相邻的缅甸URFs的原因占比相似[9]。造成德宏州仍有较高比例URFs的原因,一方面可能是长期流行导致的HIV-1基因库的复杂性,另一方面导致多重感染的高危因素可能持续存在。
本研究发现,德宏州的中国籍HIV-1基因亚型种类多于缅甸籍,检测到流行于深圳、广州市等地MSM人群的CRF55_01B亚型[10-11],原因是该基因亚型可能由国内其他地区输入。不同传播途径的HIV-1基因亚型分布也有差异,异性性传播的HIV感染者包括了HIV-1基因亚型的所有种类,说明了异性性传播的复杂性。
红河州的HIV-1基因亚型一般以CRF08_BC为主[12],但是,本研究发现,红河州的HIV-1基因亚型以CRF01_AE为主,越南籍CRF01_AE的比例达到81.0%,这与越南以CRF01_AE为主要流行株的研究结果相一致[13]。但中国籍的感染者中,除CRF01_AE外,还有一定比例的CRF08_BC,这在一定程度上表明,红河州边境地区除受国内艾滋病疫情的影响外,也在受到外来疫情的影响。
本研究存在不足。纳入的HIV感染者样本偏少,分层分析受到样本数的限制。另外,有必要通过后续研究HIV感染者的社会网络和HIV-1基因亚型的关系,帮助发现更多的HIV感染者。
综上所述,云南省2个边境地区艾滋病流行受到了跨境外籍感染者的影响,新报告HIV感染者HIV-1基因亚型分布差异较大,应对中国籍和外国籍HIV感染者采取有针对性的防治措施。
志谢 本研究得到云南省德宏州CDC王继宝、瑞丽市CDC李洲林、红河州CDC张维义、河口县CDC朱志斌以及他们的同事和各项目点志愿者的支持和帮助
利益冲突 无
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