乙型肝炎（乙肝）是一项严重的公共卫生问题，全世界有20亿人口感染过HBV，我国是乙肝高发国家，每年死于肝癌的人数达到34.4万，位居第二癌症“杀手”^[1]。人体感染HBV后可出现自身清除病毒或慢性持续性感染两种结局。慢性HBV感染患者的肝脏会出现持续性炎症、肝细胞破坏和再生循环，而该过程将导致肝纤维化、肝硬化，甚至肝癌发生。已经有研究表明，病毒因素、环境因素以及感染者自身遗传因素共同影响病毒感染的结局，且人群中的遗传变异是影响乙肝易感性以及预后的重要因素之一^[2]，故研究与HBV感染相关的易感基因和易感位点对于乙肝的防治有重要的意义。已有研究显示，很多基因的位点多态性与HBV易感性、感染后不同的结局有一定关系^[3-5]，并且在拉米夫定治疗后的病毒学应答和生化应答中起到一定作用^[6-7]，这为进一步阐明乙肝慢性化的分子遗传机制提供了有力依据。1983年，郑林星等^[8]在神经组织内发现了降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide，CGRP），CGRP是一种多功能的生物活性肽，由37个氨基酸残基组成，可在受体活性蛋白1（receptor activity modifying protein 1，RAMP1）和降钙素受体样受体（calcitonin receptor-like receptor）介导下对机体多个脏器和系统的功能产生重要的调节作用。有动物实验表明^[9]，内源性CGRP可以通过抑制肝星状细胞活化来保护肝脏，在促进肝再生过程中起着重要作用，CGRP还可减轻反复给药引起的慢性肝炎和肝纤维化，是治疗慢性肝炎的有效靶点^[10]。由此可见，CGRP可能会在病毒性肝炎肝脏损伤的治疗预后过程中发挥一定作用。携带RAMP1基因rs3754701T的个体感染HBV的风险降低。故以CGRP基因的rs155209位点和RAMP1基因的rs3754701位点为研究位点，旨在探讨中国北方汉族居民中两位点与干扰素治疗慢性乙肝预后的相关性，以期为HBV感染相关疾病的治疗提供理论依据。

对象与方法

1.研究对象：来自石家庄市第五医院和河北省第四医院，入院时间为2010年1月至2014年3月，经严格纳入和排除标准的筛选，选择首次单独应用干扰素治疗的慢性乙肝患者317例，其中男性217例，女性100例，年龄15~77岁，M（Q_R）＝54（14）岁。病例符合中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会2010年联合修订的《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准。纳入标准^[7]：中国北方汉族居民；符合慢性乙肝病例的明确诊断标准；首次应用干扰素治疗（口服，100 mg/d）；性别、年龄不限；签署知情同意书。排除标准：合并其他类型（甲、丙、丁型等）肝炎病毒患者以及HIV感染者；接受免疫抑制剂、化疗者和系统激素治疗者；多种抗病毒药物联合治疗者；药物、乙醇、自身免疫、寄生虫及其他原因所致肝损害者；急性乙肝者；不能参加或不愿在知情同意书上签字者。

2.疗效判定：参照《慢性乙型肝炎防治指南》的疗效判定标准^[11]，将纳入的首次单独经干扰素治疗6个月的慢性乙肝患者分为应答组和非应答组：根据病毒学应答（DNA检测不到或下降值＞2 log拷贝/ml）是否分为DNA应答组与DNA非应答组；根据生化学应答（ALT降至正常参考值范围）是否分为ALT应答组和ALT非应答组。

3.研究方法：

（1）资料收集：收集初次单独使用干扰素治疗的慢性乙肝患者的一般资料和实验室检查结果：一般资料包括两部分：①为患者的基本情况（性别、年龄、吸烟、饮酒、有无使用明显肝损伤药物等）；②患者的发病情况（病程、病情、其他肝病或免疫缺陷等疾病、家族史等）。实验室检查结果包括患者使用干扰素治疗前后的HBV-DNA、ALT和AST定量水平等，以上资料通过医院病历收集。

（2）全血标本采集和SNPs分型：收集纳入患者的外周血，提取其DNA，采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱进行SNPs分型分析。本研究采用共显性、显性以及隐性3种SNP分析模型，分析方法如下：假设某一可突变基因位点的野生碱基和突变碱基分别为W（野生型）和V（变异型），该基因位点可能出现的3种基因型为WW、WV、VV。在共显性模型中，将基因型WW、WV、VV分别编码为0、1、2，基因型分析时的比较方式为1/2与0比较；在显性模型中，将WW编码为0、WV+VV编码为1，基因型分析时的比较方式为1与0比较；在隐性模型中，将WW+WV编码为0、VV编码为1，基因型分析时的比较方式为1与0比较。

4.统计学分析：所有数据采用SPSS 23.0软件进行分析。使用正态性检验判断计量资料的正态性，采用[M（Q_R）]描述非正态资料的分布，两组非正态资料的比较用Wilcoxon秩和检验，两组独立样本率的比较用χ²检验。采用非条件单因素和多因素logistic回归方法，分析基因位点SNPs与应用干扰素治疗后的慢性乙肝患者DNA应答及ALT应答的关联性，计算OR值及其95%CI。以P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

1. DNA应答组与非应答组比较：根据疗效判定标准，DNA应答组与非应答组人数分别为210和106例，缺失1例。DNA应答组年龄低于DNA非应答组；DNA应答组AST水平高于DNA非应答组；在性别、ALT水平的比较中，差异无统计学意义（均P＞0.05）。见表 1。

2. ALT应答组与非应答组比较：根据疗效判定标准，ALT应答组与非应答组人数分别为155和161例，缺失1例。ALT应答组年龄差异无统计学意义（P＞0.05）；ALT应答组男性比例、ALT水平和AST水平均低于非应答组。见表 2。

3. RAMP1 rs3754701与干扰素治疗后DNA应答有关联：在共显性模型下，rs3754701T等位基因更容易出现DNA应答（AT vs. AA：OR＝2.061，95%CI：1.237~3.435，P＝0.006；TT vs. AA：OR＝5.676，95%CI：1.247~25.837，P＝0.025）；在显性模型中，两者也存在此关联。见表 3，4。

4. RAMP1 rs3754701与干扰素治疗后ALT应答有关联：在共显性模型下，rs3754701T等位基因更容易出现ALT应答（AT vs. AA：OR＝1.766，95%CI：1.098~2.840，P＝0.019）；在显性模型中也存在此关联。见表 3，4。

5. CGRP rs155209与干扰素治疗后DNA应答有关联：在共显性模型下，rs155209C等位基因更不易出现DNA应答（CT vs. TT：OR＝0.157，95%CI：0.085~0.291，P＜0.001；CC vs. TT：OR＝0.132，95%CI：0.060~0.289，P＜0.001）。在显性模型中和隐性模型中，均存在此种关联。见表 3，4。

6. CGRP rs155209与干扰素治疗后ALT应答有关联：在共显性模型下，rs155209C等位基因更不易出现ALT应答（CT vs. TT：OR＝0.530，95%CI：0.323~0.869，P＝0.012）。在显性模型中也存在此种关联。见表 3，4。

讨论

本研究采用病例对照研究来探索CGRP及其受体RAMP1的基因多态性与干扰素治疗慢性乙肝预后的关系。研究结果表明，携带有RAMP1 rs3754701基因突变者（A→T）易出现DNA应答和ALT应答，对DNA应答和ALT应答有保护作用；而CGRP rs155209位点基因突变者（T→C）不易出现DNA应答和ALT应答。

CGRP由37个氨基酸组成，相对分子质量为3.8 kD，与降钙素、肾上腺髓质素等均属于降钙素基因相关肽超家族^[8]。CGRP基因位于11号染色体短臂上，由6个外显子和5个内含子组成，按结构可分为CGRPα（CALCA）和CGRPβ（CALCB）两类。目前的研究表明，CGRP可以通过扩张肝脏血管，改善肝脏的血液循环，降低肝脏脂质过氧化物的水平来预防缺血再灌注造成的肝脏损伤^[12]。另有动物实验结果显示，内源性CGRP可以通过抑制肝星状细胞活化来保护肝脏，而给予特异的CGRP受体拮抗剂（CGRP 8-37）后，肝再生明显减弱，表明CGRP在保护肝脏以及促进肝再生过程中起着重要作用^[9]；另外，Kamiyoshi等^[10]的研究结果表明，CGRP可减轻反复给药引起的慢性肝炎和肝纤维化，CGRP及其受体是治疗慢性肝炎的有效靶点；而临床相关性研究也表明肝硬化和肝癌与CGRP循环水平升高是有关系的^[13]。由此推测，CGRP可能会在病毒性肝炎肝脏损伤的治疗预后过程中发挥一定作用。本研究结果显示，携带CGRP rs155209C等位基因的个体经干扰素治疗后较难出现DNA应答和ALT应答。究其原因，可能是CGRP rs155209位点发生突变，导致CGRP功能发生了一些改变所致。

CGRP的功能是由其受体介导的，RAMP1和CLR共表达或组合，介导CGRP的多种生物学功能，可影响细胞增殖、迁移、分化等生物学特性。RAMP1肽链由148个氨基酸残基组成，可分为3个结构域：胞外N末端、单跨膜区域和胞内C末端。其中，长N末端是与受体结合，决定受体表型的区域^[14]。本研究组前期研究结果显示，携带RAMP1基因rs3754701T的个体感染HBV的风险降低（OR＝0.731，95%CI：0.618~0.883）。本研究结果显示，携带RAMP1 rs3754701T等位基因的个体经干扰素治疗后更易出现DNA应答和ALT应答。结合本研究组前期研究工作，不难发现，就遗传学角度，RAMP1的SNP位点rs3754701的基因突变（A→T）在HBV易感性、干扰素治疗后的病毒学应答和生化应答等方面均为保护性因素，携带rs3754701T等位基因的个体，其HBV易感性降低，DNA和ALT应答度提高，由此我们可推测仅受体基因的突变也可引起CGRP作用的改变。

本研究仅为回顾性研究，且患者资料来自临床病例，故可能存在现患病例-新发病例偏倚等选择偏倚以及回忆偏倚、调查偏倚等信息偏倚，有待于采用前瞻性研究设计进一步证实二者之间的联系。

利益冲突  所有作者均声明不存在利益冲突